elisa结果怎么分析（影响elisa实验结果有哪些因素）

本文目录

• 影响elisa实验结果有哪些因素
• 如何判断ELISA的结果
• elisa试验结果数据怎么统计分析
• ELISA实验数据处理方法是怎样的
• elisa的结果如何分析
• ELISA原理和具体试验方法以及结果处理
• ELISA捕获法分析各个步骤操作完成后的结果
• ELISA结果分析时复孔值如何计算

影响elisa实验结果有哪些因素

影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法
ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。
操作步骤
可能原因
解决办法
选择试剂
选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
加
样
1.血清或血浆标本分离不好即进行加样；
2.手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)；
3.加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
1.标本为血清：最好将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。
2.加样后及时放入孵箱。
3.加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4.如果采用AT或其他全自动加样，最好选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5.标本较多时，请分批操作。
孵
育
1.孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底；
2.孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。
1.贴封片或加盖；
2.按说明步骤严格控制操作时间。
洗
板
1.采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2.采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不彻底；洗板针堵塞，抽吸不完全；洗板不畅，导致洗板效果差。
3.反应板过多造成洗板等待时间长。
1.保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后最好在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干；
2.合理安排，或多用几台洗板机。
显
色
1.
显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂；
2.
加显色剂时溅出孔外造成液体回流。
1.
显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用；
2.
加样时保持显色剂不外流；
3.A、B液应避免接触金属器械。
终
止
加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。
加终止液时应避免产生气泡。
读
板
读板时板底不清洁。
应保证酶标板清洁。
全过程
1.整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸;
2.实现ELISA检测标准自动化，有效提高检测质量。
在实际操作中，除了选择优良试剂外，必须严格按照操作步骤进行操作，同时作好室内质控、室间质评，以严谨的工作作风检测每一份标本，才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪，这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。

如何判断ELISA的结果

ELISA实验所有方法的缺点很明显：
1、重复性不好；
2、收自身抗体、嗜异性抗体等干扰，易出现假阳性；
3、不论仪器和手工操作，干扰因素较多。影响最大的是温度和时间。

1、直接法（direct ELISA） 

将抗原直接固定在固相载体上，参加酶符号的一级抗体，即可测定抗原总量，此一级抗体的特异性非常重要。

优势：操作手续简略，因无须运用二抗可防止交互反响。

缺陷：实验中的一抗都得用酶符号，但不是每种抗体都适合做符号，费用相对进步。

2.间接法（indirect ELISA） 

此测定办法与直接法相似，不一样在于一级抗体没有酶符号，改用酶符号的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。

优势：二抗能够加强信号，并且有多种挑选能做不一样的测定剖析。不加酶符号的一级抗体则能保存它最多的免疫反响性。

缺陷：交互反响发作的机率较高。

3.双抗体夹心法（sandwich ELISA） 

被检测的抗原包被在两个抗体之间，其间一个抗体将抗原固定于固相载体上，即捕捉抗体。另一个则是检测抗体，此抗体可用酶符号后直接测定抗原的量；或不符号，再透过酶符号的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体有必要当心选择，才可防止交互反响或竞争一样的抗原联系部位。-elisa结果怎么分析

优势：高活络、高专一性，抗原无须事前纯化。

缺陷：抗原必定得具有两个以上的抗体联系部位。

4.竞争法（competitive ELISA） 

样本里的抗原（自在抗原）和纯化并固定在固相载体上的抗原（固定抗原）一同竞争一样的抗体，当样品里的自在抗原越多，就能够联系越多的抗体，而固定抗原就只能联系到较少的抗体，反之亦然。经清洁过程，洗去自在抗原和抗体的复合物，只留下固定抗原和抗体的复合物，拿来与只要固定抗原的对照组成果相比拟，依据呈色区别就可计算出样品里的抗原含量。-elisa结果怎么分析

优势：可适用比拟不纯的样本，并且数据再现性很高。

缺陷：全体的敏感性和专一性都较差。

elisa试验结果数据怎么统计分析

可以分析
1.不同时期抗体水平的变化（OD值），即对照组与实验组有无区别（统计学上的区别）。
2.分析个体动物抗体水平达到明显高于对照组的时间差异，用方差分析先看总体上有无差异，然后两比较，看出现差异的每对之间是否由于一些相同的因素而导致了差异的出现，如年龄、性别、体重。
3.影响抗体产生的因素很多，如注射的部位、注射时的情况（准确与与否，量的多少等）、有无使用佐剂、佐剂的配制好坏、免疫的频率、动物的健康状况等均可影响抗体的产生，细致的分析需要做好这些详细的记录，这样在后面的分析当中才能排除一些技术上的因素，随机误差等，真正的分析出动物怎样的本身性质因素导致了抗体的产生差异。
-elisa结果怎么分析

ELISA实验数据处理方法是怎样的

ELISA试剂盒在国内有许多种叫法：例如：ELISA检测试剂盒、ELISA?Kit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等，比较常见的叫法是ELISA检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等?ELISA试剂盒自从60-70年代问世以来，得到全世界科研工作者的认可及推崇，在欧美及中国获得很大的推广，尤其是国内生化领域的长足发展。Elisa生物试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。本章交流分享：ELISA实验数据处理方法是怎样的？想要了解的同学欢迎来电咨询。
1、拟和曲线：
输入行： 浓度值， 如0 10 50 100
输入第二行：该浓度下的调整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42
选择这些输入的数据，用插入里的图表按钮，进入图表向导，在“标准类型”中选择“xy散点图”；在“子图表类型”中选择“折线散点图”，按“下一步”；选择“系列产生在行”，按“下一步”；数据标志，可以填写：如数据y轴，OD值；数据x轴，浓度；按下一步，点击完成。可得曲线图。
单击曲线，按右键，选择“添加趋势线”，在类型中，选择多项式；在选项中，选择显示公式，选择显示R平方值。
得到公式和R平方值。
也可以用上面说的方法：双击图表，把它输入到图表的数据中，就可以拟和曲线。
2、计算浓度：
次实验：
标准曲线为：
y = -4E-05x2 + 0.026x
R2 = 0.9745
为例，已知OD值，计算浓度。
由于y = -4E-05x2 + 0.026x，所以可以得到：
4E-05x2 －0.026x ＋y＝0
ax2 ＋bx ＋y＝0
a＝4E-05；b＝－0.026；
x＝（－b－（b*b－4ay）（平方根））/(2*a)
代入a，b，和y值，得
x＝（0.026－（0.026*0.026-0.00016*y）(平方根）)/(2*0.00004）
在excel里可以用以下公式表示：
x＝(0.026-EXP(LN(0.026*0.026-0.00016*y)/2))/(2*0.00004)
通用公式为：
x＝（－b－EXP(LN（b*b－4ay）/2)）/(2*a)
应用excel的公式拷贝功能，计算所有浓度
-elisa结果怎么分析

elisa的结果如何分析

可以分析
1.不同时期抗体水平的变化（OD值），即对照组与实验组有无区别（统计学上的区别）。
2.分析个体动物抗体水平达到明显高于对照组的时间差异，用方差分析先看总体上有无差异，然后两比较，看出现差异的每对之间是否由于一些相同的因素而导致了差异的出现，如年龄、性别、体重。
3.影响抗体产生的因素很多，如注射的部位、注射时的情况（准确与与否，量的多少等）、有无使用佐剂、佐剂的配制好坏、免疫的频率、动物的健康状况等均可影响抗体的产生，细致的分析需要做好这些详细的记录，这样在后面的分析当中才能排除一些技术上的因素，随机误差等，真正的分析出动物怎样的本身性质因素导致了抗体的产生差异。
-elisa结果怎么分析

ELISA原理和具体试验方法以及结果处理

LISA检测试剂盒应用定性夹心免疫检测技术，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条，这些多肽是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段，分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗体，这些抗体就会与HEV 的多肽抗原结合，并固定在上面，洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根过氧化物酶)酶结合物，经第二次孵育后，酶结合物就会与第一次孵育结合上的HEV IgM抗体相结合，洗板除去未结合的酶结合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育时会发生酶-底物反应，只有那些含有HEV IgM抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化，加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应，并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgM抗体elisa试剂盒 的测试标准, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性操作步骤：
1. 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。
4. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5. 每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。
8. 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。
结 果 判 断 与 分 析：
1、 仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、 以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的S-100B标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的S-100B含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度，再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
3、 检测值范围： 0-200ng/ml
4、 敏感度：1.0ng/ml
-elisa结果怎么分析

ELISA捕获法分析各个步骤操作完成后的结果

摘要
elisa试剂盒结果分析步骤:1.不同时期抗体水平的变化（OD值），即对照组与实验组有无区别（统计学上的区别）。
2.分析个体动物抗体水平达到明显高于对照组的时间差异，用方差分析先看总体上有无差异，然后两比较，看出现差异的每对之间是否由于一些相同的因素而导致了差异的出现，如年龄、性别、体重。
3.影响抗体产生的因素很多，如注射的部位、注射时的情况（准确与与否，量的多少等）、有无使用佐剂、佐剂的配制好坏、免疫的频率、动物的健康状况等均可影响抗体的产生，细致的分析需要做好这些详细的记录，这样在后面的分析当中才能排除一些技术上的因素，随机误差等，真正的分析出动物怎样的本身性质因素导致了抗体的产生差异。
-elisa结果怎么分析

ELISA捕获法分析各个步骤操作完成后的结果。

elisa试剂盒结果分析步骤：1.不同时期抗体水平的变化（OD值），即对照组与实验组有无区别（统计学上的区别）。2.分析个体动物抗体水平达到明显高于对照组的时间差异，用方差分析先看总体上有无差异，然后两比较，看出现差异的每对之间是否由于一些相同的因素而导致了差异的出现，如年龄、性别、体重。3.影响抗体产生的因素很多，如注射的部位、注射时的情况（准确与与否，量的多少等）、有无使用佐剂、佐剂的配制好坏、免疫的频率、动物的健康状况等均可影响抗体的产生，细致的分析需要做好这些详细的记录，这样在后面的分析当中才能排除一些技术上的因素，随机误差等，真正的分析出动物怎样的本身性质因素导致了抗体的产生差异。
-elisa结果怎么分析

请问您还有其他问题吗?如果您对我的服务满意麻烦给个评价吧！感谢你的提问希望我的回答能给您帮助如果方便请给个赞。万分感谢

ELISA结果分析时复孔值如何计算

•        ELISA结果分析时复孔值计算步骤：

• 1.棋盘滴定又称为方阵滴定，即同时将抗原、抗体进行稀释，进行ELISA实验从而确定抗原抗体反应的最佳比例！方阵滴定不太好做，你可以将方阵滴定拆开进行，即先固定抗原，使用不同浓度的抗体，从而确定最佳抗体浓度，然后固定这个抗体浓度，使用不同浓度的抗原，继而确定最佳抗原浓度。当然包被抗原、抗体浓度也有所依据，即抗原一般是1-5ug/ml 、抗体是1-15ug/ml包被。-elisa结果怎么分析

• 2.ELISA实验作预试验也是比较重要的，这样可以确定抗原抗体大致的使用量，可以确定酶标抗体的稀释浓度，可以检测实验系统是否正确……你既然做双夹心，可以先固定被检测抗原的浓度，采用不同浓度的包被抗体和不同浓度的检测抗体，确定最佳包被和检测系统。-elisa结果怎么分析

• 3. 你要检测血浆中的IL-12和IFN-y，可能会由于红细胞内源性过氧化氢酶而影响实验的敏感性，最好做好正常血浆的对照。