本文目录一览：
- 1、westernblot的原理及操作步骤,应用有哪些
- 2、“第二抗体”和“二抗”的区别是什么?
- 3、Western杂交中,为何要引入二抗?为何不在一抗上直接加上放射性同位素或者...
- 4、westernblotting中的一抗和二抗有什么用
- 5、一抗,二抗如何选择?
westernblot的原理及操作步骤,应用有哪些
Western blot的原理：简单来说原理就是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
western blot实验操作步骤如下： 准备样品 1）制冰，准备冰盒。2）配制细胞裂解液：根据细胞数量确定所需裂解液：50ul/六孔板一孔 。
western blot操作流程如下：收集蛋白样品(Protein sample preparation)使用细胞裂解液，对贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品进行裂解。然后测定每个蛋白样品的蛋白浓度。电泳(Electrophoresis)(1) SDS-PAGE凝胶配制。-westernblot为什么要用二抗
此外，由于蛋白质的电泳分离几乎总在变性条件下进行，因此溶解、聚集以及靶蛋白与外来蛋白的共沉淀等诸多问题全都无需加以考虑。伯乐生命bio-rad Trans-Blot 转印槽是一种多功能仪器，适用于多种Westernblot法应用。-westernblot为什么要用二抗
其实原理很简单，你要坚持某种蛋白在样品中是否含有或者大致的量，你就可以先购买或制备该蛋白的抗体，之后通过电泳实验，将蛋白样品简单分离，可以是按分子量分离也可以是按等电点分离，或者进行双向电泳，一般使用SDS-PAGE。-westernblot为什么要用二抗
“第二抗体”和“二抗”的区别是什么?
1、区别如下：第一抗体就是平常所说的抗体，即能和抗原特异性结合。第二抗体是能和抗体结合的，即抗体的抗体。主要用于检测抗体的存在。一抗是针对抗原的抗体，二抗是针对一抗的抗体。即抗体也可以充当抗原刺激机体产生抗体。-westernblot为什么要用二抗
2、一抗就是第一抗体。即能和非抗体性抗原特异性结合的蛋白。二抗是第二抗体。即利用抗体是大分子的蛋白质具有抗原性的性质，去免疫异种动物，由异种动物的免疫系统产生的针对于此抗体的免疫球蛋白。简单来说就是抗体的抗体。-westernblot为什么要用二抗
3、第一抗体就是平常所说的抗体，即能和抗原特异性结合。第二抗体是能和抗体结合的，即抗体的抗体。主要用于检测抗体的存在。一抗是针对抗原的抗体，二抗是针对一抗的抗体。即抗体也可以充当抗原刺激机体产生抗体。-westernblot为什么要用二抗
Western杂交中,为何要引入二抗?为何不在一抗上直接加上放射性同位素或者...
1、之所以用二抗，是因为二抗是带有酶标的抗体，它跟一抗结合之后可以曝光显影。如果你的一抗上面直接带有酶标物，那可以不用二抗直接曝光。但是一般你的一抗都是少数应用的，厂家不会大批量生产，就不会费劲给它加酶标。-westernblot为什么要用二抗
2、这是蛋白质的免疫印迹法研究蛋白质。加入的一抗作为抗体与膜上的抗原蛋白结合，再加入酶偶联或放射性同位素标记的二抗与一抗结合后，通过显色或放射自显影发检测凝胶中的蛋白质。
3、每换一种抗体，就需要重新连接一次，这不仅麻烦，成本也就高了。而抗体的Fc段是不变的，也就是一抗的Fc段不变，那么只需要连接针对一抗Fc段的二抗就足够应付任何情况了，这样就容易得多。
4、由于此过程中，可能有未结合到抗原的抗体遗留，故需要清洗，以便保存特异性结合的抗原-抗体结合物。抗原抗体结合物暴露出一个Fc片段，相应的二抗可以结合到这个片段上，形成抗原-一抗-二抗结合物。
westernblotting中的一抗和二抗有什么用
之所以用二抗，是因为二抗是带有酶标的抗体，它跟一抗结合之后可以曝光显影。如果你的一抗上面直接带有酶标物，那可以不用二抗直接曝光。但是一般你的一抗都是少数应用的，厂家不会大批量生产，就不会费劲给它加酶标。-westernblot为什么要用二抗
WB一抗二抗是乙肝病毒感染的免疫学检测方法。WB是Western Blotting的缩写，即蛋白印迹技术，可以检测人体内是否存在抗乙肝病毒的抗体。一抗是指检测乙肝表面抗原（HBsAg）的抗体，二抗是指检测乙肝表面抗体（HBsAb）的抗体。-westernblot为什么要用二抗
一抗就是与待检测蛋白质特定结合的抗体啊，二抗是带有荧光标记并可以与一抗特异结合的。
一抗,二抗如何选择?
二抗选择 （1）种属来源。主要根据一抗种属来源而决定二抗来源，如一抗是小鼠来源，那二抗就买抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。（2）标记物的选择。有HRP、Biotin、荧光素等标记物。
二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。
一抗选择实验类型的种属，二抗选择种属来源。一抗确定你的实验类型，Elisa，WB，IHC，ICC，还是FACS，确定实验样本的种属，Human，Mouse，还是Rat。
那么你的一抗的反应种属当中，要包括大鼠。第三要根据你的一抗来源选择你的二抗，比如你的一抗选的是小鼠来源的抗体，你的二抗就要选择XX抗小鼠的，如果你的一抗选的是兔源性的抗体，二抗就选择XX抗兔的。
